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蛋白質(zhì)技術(shù)專題：豆粕中尿素酶活性的測定
更新時(shí)間：2013-12-17 瀏覽次數(shù)：1799
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
掌握測定尿素酶活性的各種方法的基本原理及方法步驟。
二、實(shí)驗(yàn)原理
將粉碎的大豆制品與中性尿素緩沖溶液混合，在30℃保持30min后，尿素酶催化尿素水解產(chǎn)生氨的反應(yīng)。用過量的鹽酸溶液中和所產(chǎn)生的氨，再用氫氧化標(biāo)準(zhǔn)溶液回滴。
三、實(shí)驗(yàn)設(shè)備
1、樣品篩：孔徑200μm；
2、酸度計(jì)：精度0.02pH，附有磁力攪拌器和滴定裝置；
3、恒溫水?。嚎煽販?0±0.5℃；
4、試管：直徑18mm，長1 50mm，有磨口塞子；
5、精密計(jì)時(shí)器；
6、粉碎機(jī)：粉碎時(shí)應(yīng)不生強(qiáng)熱（如球磨機(jī)
7、分析天平．感量0.1mg；
8、移液管；10mL。
四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
1、稱取約0.2g已粉碎的試樣，稱準(zhǔn)至0.1mg，轉(zhuǎn)入試管中，（如活性很高的樣品，可只稱0.05g試樣），移入10ml尿素緩沖溶液，立即蓋好試管并劇烈搖動(dòng)，馬上置于30±0.5℃恒溫水浴中，準(zhǔn)確計(jì)時(shí)保持30min。即刻移人10m1鹽酸溶液，迅速冷卻到20℃。
2、將試管內(nèi)容物全部轉(zhuǎn)入燒杯，用5ml水沖洗試管兩次，立即用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定到pH4.70 。
3、另取試管作空白試驗(yàn)，移人10ml尿素緩沖液，10ml鹽酸溶液。稱取與上述試樣量相當(dāng)?shù)脑嚇?，也稱準(zhǔn)至0.1mg，迅速加入此試管中。立即蓋好試管并劇烈搖動(dòng)，將試管置于30±0.5℃的恒溫水浴，同樣準(zhǔn)確保持20min，冷卻至20℃，將試管內(nèi)容物全部轉(zhuǎn)入燒杯，用5mL水沖洗試管兩次，并用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至pH 4.70。
4、以每分鐘每克大豆制品釋放氨的mg量來表示尿素酶的活性（UA），可按下式計(jì)算：
若試樣經(jīng)粉碎前的預(yù)干燥處理時(shí)，則其計(jì)算如下：
由一個(gè)分析人員用相同方法，同時(shí)或連續(xù)兩次測定結(jié)果之間的相差，應(yīng)不超過平均值的10％，以其算術(shù)平均值報(bào)告結(jié)果。