蛋白質(zhì)技術(shù)專題：重組DNA技術(shù)與基因工程（組圖）
更新時(shí)間：2013-11-27 瀏覽次數(shù)：1504
重組DNA技術(shù)是現(xiàn)代分子生物技術(shù)發(fā)展中zui重要的成就之一。即是基因工程（Gene Engineering）的核心技術(shù)。
重組DNA技術(shù)（Recombinant DNA Technique）是人類根據(jù)需要選擇目的基因（DNA段）在體外與基因運(yùn)載體重組，轉(zhuǎn)移至另一細(xì)胞或生物體內(nèi)，以達(dá)到改良和創(chuàng)造新的物種和治療人類疾病的目的。
這一技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用，關(guān)鍵在于限制酶的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用。
一、限制酶
限制性內(nèi)切核酸酶（restrictive endonucleases），又稱限制酶。是特異性地切斷DNA鏈中磷酸二酯鍵的核酸酶（“分子手術(shù)刀”）。
發(fā)現(xiàn)于原核生物體內(nèi)，現(xiàn)已分離出100多種，幾乎所有的原核生物都含有這種酶。是重組DNA技術(shù)和基因診斷中重要的一類工具酶。
1、限制酶的命名
根據(jù)其來源命名。如：
EcoRI來源于大腸桿菌E.coli的RY13菌株,I指在該菌株中分離的*個(gè)限制酶。
2、限制酶識(shí)別序列和切割形成
每種限制酶能識(shí)別和切割的通常4～8個(gè)核苷酸序列，稱為限制性位點(diǎn)或切點(diǎn)。
部分常用限制酶及切點(diǎn)
互補(bǔ)末端連接
產(chǎn)生相同序列的突出末端的不同片段 可有三種方式：
1）用同一種限制酶切割；
2）用識(shí)別相同靶序列的不同限制酶切割；
3）用識(shí)別不同靶序列但可產(chǎn)生一致的粘性末端的限制酶切割。
3、特點(diǎn)：
根據(jù)上述限制酶的特點(diǎn)，在基因工程和基因診斷中的重要用途：
1） 不論DNA的來源如何，同一種限制酶切割后產(chǎn)生的粘性末端容易重新連接。因此可將不同種屬的DNA重組。如人和質(zhì)粒DNA等。
2） 用于人類基因組的DNA分析，具特定的酶切位點(diǎn)。
3） Gene突變改變酶切位點(diǎn)的消失或新產(chǎn)生將改變酶切片段長度。應(yīng)用于限制性片段多態(tài)性分析。
二、基因運(yùn)載體及其選擇
載體（Vector）:將外源目的DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞，并能自我復(fù)制和增殖的工具。
載體具以下特征：
1）分子量小，便于攜帶較大的DNA段，能進(jìn)入宿主細(xì)胞并在其中增殖；
2）有多種限制酶切點(diǎn)，每種限制酶只有單一切點(diǎn)；
3）被切割后的載體，插入外源DNA后，不影響其復(fù)制能力，并有可選擇的標(biāo)記基因（如，抗藥基因）。
常用的載體有：質(zhì)粒，λ噬菌體，粘粒，BAC，YAC，PI等。