專題:脂質(zhì)體介導(dǎo)DNA轉(zhuǎn)染法
更新時間：2013-07-08 瀏覽次數(shù)：1698
細(xì)胞種類：COS-7、BHK、NIH3T3、Hela和Jurkat等任何一種細(xì)胞均可作為受體細(xì)胞。
3. 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備：用2mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入1mL不含血清培養(yǎng)液。
4. 轉(zhuǎn)染：把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃溫箱置6～24小時，吸除無血清轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
5. 其余處理如觀察、篩選、檢測等與其它轉(zhuǎn)染法相同。
注意：轉(zhuǎn)染時切勿加血清，血清對轉(zhuǎn)染效率有很大影響。
二、快速脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法操作步驟如下[方法二]：
1. 以5×105 細(xì)胞/孔接種6孔板（或35mm培養(yǎng)皿）培養(yǎng)24小時，使其達(dá)到50～60%板底面積。
2. 在試管中配制DNA/脂質(zhì)體復(fù)合物方法如下：
①在1mL無血清DMEM中稀釋PSV2-neo質(zhì)粒DNA或供體DNA。
②旋轉(zhuǎn)1秒鐘，再加入脂質(zhì)體懸液，旋轉(zhuǎn)。
③室溫下放置5～10分鐘，使DNA結(jié)合在脂質(zhì)體上。
3. 棄去細(xì)胞中的舊液，用1mL無血清DMEM洗細(xì)胞一次后棄去，向每孔中直接加入1mL DNA/脂質(zhì)體復(fù)合物，37℃培養(yǎng)3～5小時。
4. 再于每孔中加入20%FCS的DMEM，繼續(xù)培養(yǎng)14～24小時，
5. 吸出DMEM/DNA/脂質(zhì)體混合物加入新鮮10%FCS的DMEM，2mL/孔，再培養(yǎng)24～48小時。
6. 用細(xì)胞刮或消化法收集細(xì)胞，以備分析鑒定。
四、穩(wěn)定的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法如下：
1. 接種細(xì)胞同前，細(xì)胞長至50%板底面積可用于轉(zhuǎn)染。
2. DNA/脂質(zhì)體復(fù)合物制備轉(zhuǎn)染細(xì)胞同前2、3步驟。
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