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技術(shù)文章

ELISPOT技術(shù)的應(yīng)用與展望

更新時(shí)間：2013-06-30 瀏覽次數(shù)：1511

ELISPOT技術(shù)的*優(yōu)點(diǎn)已經(jīng)讓它在抗原特異性T細(xì)胞免疫學(xué)研究上*。它是當(dāng)今*能夠檢測到到百萬分之一陽性細(xì)胞率的檢測技術(shù)。如此高的靈敏度就連流式細(xì)胞技術(shù)（細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色）和tetramer技術(shù)也*（Letsch A et. al.， 2003）。此外由于淋巴細(xì)胞的凍存復(fù)蘇問題也得到了的解決，經(jīng)過凍存復(fù)蘇的細(xì)胞并不喪失免疫功能（Maecker HT et. al.， 2005；Kvarnstrom M et. al.， 2004）。這一點(diǎn)對臨床試驗(yàn)非常重要，它使科研人員得以并行分析免疫治療前、后的病人血樣。如果試驗(yàn)牽涉全國乃至多個(gè)臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)，病人血樣可凍存、運(yùn)輸?shù)降胶诵膶?shí)驗(yàn)室儀器檢測。同理，一個(gè)實(shí)驗(yàn)樣品或標(biāo)準(zhǔn)對照品可分裝凍存，運(yùn)輸?shù)讲煌膶?shí)驗(yàn)室檢測，以資比較。

所以，ELISPOT技術(shù)的應(yīng)用在國外已經(jīng)*普及。凡是需要進(jìn)行免疫學(xué)檢測的地方機(jī)會都可以應(yīng)用該項(xiàng)技術(shù)。粗略的劃分可以分為以下幾類：

1、疫苗研究開發(fā)

ELISPOT檢測已經(jīng)成為評價(jià)疫苗細(xì)胞免疫反應(yīng)zui有效的指標(biāo)（Harrop R et. al.， 2004）。我們知道，疫苗的保護(hù)效果可以分為兩部分：體液免疫保護(hù)和細(xì)胞免疫保護(hù)。有效的疫苗不僅能夠激發(fā)強(qiáng)烈的體液免疫，也能激發(fā)有效的細(xì)胞免疫（Holmgren J et. al.， 1992b）。對于某些持續(xù)性感染的疾病，疫苗的細(xì)胞免疫保護(hù)效果甚至居于主要地位。zui的例子是艾滋病疫苗開發(fā)（Lee FK et. al.， 1989；Stratov I et. al.， 2004）。由于艾滋病毒的超級突變能力，體液免疫往往會被病毒輕易逃避，體內(nèi)真正控制病毒復(fù)制的因素是細(xì)胞免疫反應(yīng)，即清除受感染的CD4+細(xì)胞（Vahlne A et. al.， 1991；Maecker HT et. al.， 2003）。除了預(yù)防性的疫苗開發(fā)之外，治療性疫苗也是目前疫苗開發(fā)的重要組成部分。治療疫苗的主要功能在于重新激發(fā)起人體內(nèi)被抑制的針對病源細(xì)胞免疫反應(yīng)。目前的治療儀表包括乙肝疫苗、黑色素瘤疫苗（Zarour HM et. al.， 2003）、肝癌疫苗（Chi KH et. al.， 2005）、自身免疫疫苗等等。

2、臨床指導(dǎo)

許多疾病的發(fā)生、發(fā)展都是與人體的免疫系統(tǒng)異常相關(guān)聯(lián)的。比如各種自身免疫疾病：I-型糖尿?。↘arlsson Faresjo MG et. al.， 2005），多發(fā)硬化癥（Moldovan IR et. al.， 2005）、系統(tǒng)性紅斑狼瘡（Kalsi JK et. al.， 2004）、牛皮癬/銀屑?。⊿igmundsdottir H t. al.， 1997）、結(jié)核?。≧estrepo BI 2004）、自身免疫性心肌炎（Maier R et. al.， 2005）、自身免疫性感音性耳聾（Solares CA et. al.， 2005）、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（Klatt T et. al.， 2005）、.視神經(jīng)脊髓炎（Correale J et. al.， 2004）等等。在這些疾病的診斷、病因查找中，ELISPOT檢測可以提供非常重要的信息，甚至成為zui終指標(biāo)。比如在I-型糖尿病的診斷中，ELISPOT可以提供zui終的判定依據(jù)（Meierhoff G et. al.， 2002）。而對有糖尿病史的家族，做ELISPOT檢測，甚至可以在疾病發(fā)作之前5-10年作出（Karlsson Faresjo MG et. al.， 2005；Seissler J et. al.， 2001）。這對于指導(dǎo)病人的日常生活，提高治療效果有著重要的現(xiàn)實(shí)意義。

ELISPOT除了直接用于臨床診斷，還可以對于治療和用藥提供重要的參考信息。比如對于器官移植者，用ELISPOT監(jiān)視患者體內(nèi)的免疫排斥反應(yīng)，可以有針對性的用藥，避免盲目的使用免疫抑制劑（Tung TH et. al.， 2005）。這對于增加移植手術(shù)的成功率，延長移植器官的存活率，提高病人的生活質(zhì)量意義重大（van Besouw NM et. al.， 2005；Tambur AR et. al.， 2005）。類似的ELISPOT免疫監(jiān)視也見于基因治療的病人（Whiteside TL et. al.， 2003）。再比如對于乙肝病人，如果用ELISPOT檢測觀者所處的免疫階段（急性期、平穩(wěn)期、耐受期、恢復(fù)期），有針對的用藥，同時(shí)評估各種藥物對于觀者的治療效果，遠(yuǎn)優(yōu)于盲目治療（Fan ZP et. al.， 2004；Lohr HF et. al.， 1998）。

3、基礎(chǔ)研究

ELISPOT技術(shù)本來就是在基礎(chǔ)研究中創(chuàng)立和發(fā)展起來的。生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的基礎(chǔ)研究日新月異，ELISPOT有不可磨滅的功勛。但也正是由于基礎(chǔ)研究的發(fā)展快，ELISPOT的應(yīng)用廣，所以才難于分門別類?？陀^地說，在一切免疫學(xué)研究的前沿領(lǐng)域，ELISPOT都是zui有力的研究工具之一。比如研究人體的免疫系統(tǒng)功能，研究Th0/Th1/Th2細(xì)胞轉(zhuǎn)換分析（Ott PA et. al.， 2005），研究機(jī)體的過敏機(jī)制（Bordignon V et. al.， 2005；Chapoval SP et. al.， 2002），研究癌癥的免疫機(jī)制（Andersen MH et. al.， 2005；Alix-Panabieres C et. al.， 2005），研究和篩選有效的T細(xì)胞表位肽（Anthony DD et. al.， 2003）等等等等，可謂名目繁多，不一而足。ELISPOT技術(shù)在基礎(chǔ)研究方面所受的限制不在于技術(shù)本身，而在于我們的想象能力與創(chuàng)新思維。

展望未來的ELISPOT技術(shù)，會在技術(shù)進(jìn)步本身和應(yīng)用領(lǐng)域擴(kuò)展兩個(gè)方面都有長足的發(fā)展。就技術(shù)本身來說，更好的底板材料，無血清檢測技術(shù)，雙因子檢測，多因子熒光檢測，都會逐漸成熟起來。ELISPOT應(yīng)用領(lǐng)域的拓展可以從每年發(fā)表文獻(xiàn)的數(shù)量變化上反映出來。圖顯示了美國國立衛(wèi)生院生物信息中心論文數(shù)據(jù)庫（NCBI PubMed）收錄的自ELISPOT創(chuàng)立以來年度論文的數(shù)目。該圖反映了ELISPOT技術(shù)經(jīng)歷起起伏伏，終于發(fā)揚(yáng)光大，成為免疫學(xué)主流檢測技術(shù)的歷程。

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